Справочник врача 21

Поиск по медицинской литературе


Монодиагностикум




Диагностика Основные методы диагностики  — бактериологическое исследование испражнений, крови, мочи, рвотных масс и промывных вод желудка, а также выявление антител к сальмонеллам в РНГА, реакции Vi-агглютинации с типовыми сыворотками и/или линейной РА (реакция Видаля). В качестве антигенов используют монодиагностикумы к конкретным возбудителям. Исследования рекомендуют начинать с 7-х суток (время нарастания титра антител). [стр. 306 ⇒]

В целом бактериологическое подтверждение диагноза брюшного тифа удается получить у 80-90% больных. Серологические методы лабораторной диагностики брюшного тифа позволяют обнаружить специфические антитела в крови или антигены в биосубстрате. В практической работе чаще всего применяют реакцию Видаля и ΡΗΓΑ (реакция непрямой гемагглютинации) с использованием эритроцитарных О-, Н- и Vi-антигенов. Реакция Видаля основана на обнаружении специфических О- и Н-антител-агглютининов в крови больного с помощью соответствующих антигенов. Положительные результаты чаще всего можно получить, начиная с 8-9 дня болезни. Реакция Видаля может быть положительной у привитых и перенесших брюшной тиф ранее, поэтому решающее значение будет иметь нарастание титра антител в динамике заболевания. Для более точного выявления специфических иммунных сдвигов в крови больного реакцию Видаля следует повторять с О- (IX и XII) и Н-монодиагностикумами для исключения перекрестных реакций с сальмонеллами других групп. Более специфической и чувствительной является ΡΗΓΑ с эритроцитарными О- и Vi-антигенами и реакция Vi-гемагглютинации. Эти реакции используются для ранней диагностики брюшного тифа. В ΡΗΓΑ концентрация О-антител нарастает в динамике заболевания, тогда как титры Vi-антител существенно не меняются. Реакция Viгемагглютинации имеет наибольшее значение при обследовании лиц, подозрительных на брюшнотифозное носительство. Серологические реакции на обнаружение специфических антител в крови больного следует ставить в динамике заболевания начиная с 4-5 дня болезни, а затем на 2-3 неделе и позднее. Диагноз брюшного тифа считается серологически подтвержденным при титре антител 1:200 и выше или при нарастании титра антител в 2-3 раза в динамике заболевания. При оценке серологических реакций важно учитывать, что нарастание титров специфических О-антител свидетельствует об остро протекающем инфекционном процессе, а наличие только Н- или Vi-антител — о перенесенном ранее брюшном тифе или бактерионосительстве. В последние годы для серологической диагностики бактерионосительства и вакцинальных реакций предложено раздельное определение специфических антител, относящихся к иммуноглобулинам класов Μ и G в реакции иммунофер... [стр. 437 ⇒]

IV. ДИАГНОСТИКУМЫ Диагностикумы – взвесь убитых микробов или их отдельные антигены. Цель применения: в иммунных реакциях для обнаружения антител к данному виду микроба в сыворотке крови больного или определения титра антител в парных сыворотках больного (серодиагностика). В качестве антигена в иммунной реакции могут быть использованы и живые культуры микробов. Классификация диагностикумов Корпускулярные – из целых микробных клеток или вирусных частиц. Примеры: бруцеллезный, коклюшный, дизентерийный и др. Монодиагностикумы – из отдельных антигенов микробной клетки (O, H, Vi). Примеры: сальмонеллезный Н-диагностикум, холерный О-диагностикум и др. Эритроцитарные – препараты, содержащие антигены, адсорбированные на эритроцитах, обработанных танином. Используют в реакции непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА/РПГА). Примеры: эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум, эритроцитарный дифтерийный диагностикум. [стр. 26 ⇒]

Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микробов, различных биологически активных веществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепторов клеток и др. При выделении микроба от больного проводят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т. е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов. В микробиологии и иммунологии широко применяются реакции агглютинации, преципитации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный методы). Перечисленные реакции различаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако, все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов. Реакции иммунитета характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью. Особенности взаимодействия антитела с антигеном являются основой диагностических реакций в лабораториях. Реакция invitroмежду антигеном и антителом состоит из специфической и неспецифической фазы. В специфическую фазу происходит быстрое специфическое связывание активного центра антитела с детерминантой антигена. Затем наступает неспецифическая фаза — более медленная, которая проявляется видимыми физическими явлениями, например образованием хлопьев (феномен агглютинации) или преципитата в виде помутнения. Эта фаза требует наличия определенных условий (электролитов, оптимального рН среды). Связывание детерминанты антигена (эпитопа) с активным центром Fab-фрагмента антител обусловлено ван-дер-ваальсовыми силами, водородными связями и гидрофобным взаимодействием. Прочность и количество связавшегося антигена антителами зависят от аффинности, авидности антител и их валентности. № 85 Диагностикумы. Получение, применение. В диагностических целях при обнаружении антител в сыворотке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосителей используются серологические реакции. Для постановки таких реакций применяются диагностикумы - препараты, содержащие взвесь обезвреженных микроорганизмов или определенные антигены. Необходимость использования диагностикумов для серологических реакций связана не только с явным их преимуществом перед живыми культурами микробов (безопасность в работе), но еще и потому, что для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувствительностью к антителам и способностью длительно сохранять антигенные свойства. Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются химические вещества, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные свойства и применяются редко. В серологических реакциях (реакции агглютинации, реакции пассивной гемагглютинации, реакции связывания комплемента, реакции торможения гемагглютинации) для выявления специфических антител применяются: бактериальные, эритроцитарные и вирусные диагностикумы. Бактериальные диагностикумы могут содержать инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н или Vi-антигены и используются в реакциях агглютинации. Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с адсорбированными на них антигенами, извлеченными из бактерий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации). В том случае, когда РПГА используется для выявления антигена в выделениях больных, в тканях и др., применяют «антительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сенсибилизированные антителами. Вирусные диагностикумы — препараты, содержащие инактированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом), применяются в РСК (реакции связывания комплемента), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации. В настоящее время в лабораториях используются следующие диагноста кумы. 1. Бактериальный диагностикум сальмонелл тифа. Применяется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных. 2. Сальмонеллезные О-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%-ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-аптител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглютинации с сывороткой больных. 3. Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы. Используются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реже с диагностической целью. 4. Vi — брюшнотифозный диагностикум. Применяется в реакции агглютинации при выявлении брюшнотифозного бактерионосительства. 5. Единый бруцеллезный диагностикум — взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона. 6. Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум — взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллеэной инфекции. 7. Эритроцитарный Vi-диагностикум — эритроциты, сенсибилизированные очищенным Vi-антигеиом S. typhi, применяется в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионосительства. [стр. 52 ⇒]

Для приготовления антигенных препаратов подбирают специальные штаммы микробов, обладающих высокой специфичностью и сохраняющих свои антигенные свойства после обработки. Антигенные препараты бывают корпускулярные и растворимые. Если корпускулярный антиген представляет собой взвесь убитых микроорганизмов, то растворимый - антигенные фракции. Растворимые антигены отличаются большей чувствительностью и стабильностью. Корпускулярные антигены готовят из взвеси микроорганизмов, инактивированных нагреванием при 100 в течение 15 – 20 минут, а также – спиртом или формалином. Растворимые антигены представляют собой антигенные фракции, полученные путем экстракции из чистой культуры микроорганизмов. Стандартные антигены, которые используются в иммунологических реакциях для выявления соответствующих им (специфических) антител в исследуемых сыворотках называются диагностикумами. Тонкие различия АТ в изучаемой сыворотке обнаруживают при помощи монодиагностикумов, т.е. препаратов, содержащих один антиген, например: групповой О- или специфический типовой –Н- , или Vi- антиген. Такие монодиагностикумы готовят, например, для распознавания заболеваний, вызванных микроорганизмами рода сальмонелл. В практике широко применяют в настоящее время эритроцитарные диагностикумы. Эритроцитарные диагностикумы содержат эритроциты человеческой или бараньей крови, сенсибилизированные бактериальными, риккетсиозными или вирусными антигенами. Для создания прочной связи антигена с поверхностью эритроцитов, последние предварительно обрабатывают таннином, формальдегидом, глютаровым альдегидом, на альдегидные группировки, которых прочно “садится” антиген. Применяют для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Кроме эритроцитов, антигены могут адсорбироваться на поверхности активированного угля, латекса, холестерина, каолина и других органических и неорганических адсорбентов. 7.1. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ АНТИГЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ ● Бруцеллезный единый диагностикум – взвесь убитых форамалином либо нагреванием бруцелл трех видов в физиологическом растворе хлорида натрия с добавлением метиленового синего. Препарат выпускается в жидком виде и представляет гомогенную взвесь бруцелл, окрашенную в синий цвет. Применяют для постановки как развернутой реакции агглютинации с сывороткой больного ( р.Райта ), так и на стекле ( р. Хеддельсона ) с целью серодиагностики бруцеллеза. ● Брюшнотифозный О - диагностикум – взвесь бактерий брюшного тифа, убитых нагреванием при100 . ● Брюшнотифозный Н - диагностикум – взвесь бактерий, инактивированных формалином. Оба брюшнотифозных диагностикума используют в реакции Видаля для серодиагностики брюшного тифа. 71... [стр. 65 ⇒]

Факультативные анаэробы, мезофилы. Неприхотливы к условиям культивирования. МПА – полупрозрачные, бесцветные, круглые 2-4 мм колонии. Возможна RS-диссоциация. Сальмонеллы паратифа В вокруг колоний образуют слизистый валик. МПБ – диффузное помутнение. Среды с желчью являются элективными (желчный бульон, среда Рапопорт). Желчь препятствует свёртыванию крови, нейтрализует антитела, комплемент, снижая бактерицидные свойства крови и сохраняя питательные. Среда Рапопортферментация глюкозы и учёт газообразования (желчный МПБ, глюкоза, поплавок, индикатор). ДДС – бесцветные лактозо-отрицательные колонии. Высокоселективная плотная ДДС – Висмут-сульфит агар (чёрные блестящие колонии). Среднеселективная ДДС среда – Плоскирева. Среды обогащения – селенитовый бульон, среда Мюллера с тетратионатом натрия, среда Кауфмана (хлористо-магниевый бульон). Комбинированные полиуглеводные среды – Олькеницкого, Клиглера, Ресселя. 1. Ферментируют углеводы (глюкоза, маннит, мальтоза) с образованием кислоты и газа. Не ферментируют лактозу и сахарозу. ! S.Typhi не выделяет газ при ферментации углеводов. 2. Каталазоположительны, оксидазоотрицательны. 3. При расщеплении белков выделяют сероводород (кроме S.Paratyphi A). Не образуют индол, не расщепляют мочевину. 4. Бактерии паратифа В отличаются от А способностью щелочить молоко (+лакмус) за счёт расщепления белка (посинение). 1. Бактериологическое исследование Материал: испражнения, кровь, моча, желчь, соскоб розеол. Ранний метод (при бактериемии) – выделение возбудителя из крови (получение гемокультуры). ◘ Кровь → посев в среду Раппопорт 1:10 → висмут-сульфит агар (или любая ДДС) → пересев подозрительной колонии на комбинированные среды → изучение морфологических, тинкториальных, б/х свойств → РА на стекле с диагностическими О- и Н-антисыворотками, фаготипирование, чувствительность к АБ. ◘ Испражнения, желчь, моча (поздние методы диагностики) → среда обогащения любая→ ДДС… 2. СЕРОДИАГНОСТИКА (с 5-7 дня болезни). В основном используется РНГА с О- и Н-эритроцитарным диагностикумом (диагностический титр 1:200 и выше). В начале ставится с комплексным эритроцитарным диагностикумом АBCDE, затем с брюшнотифозным эритроцитарным О9-диагностикумом, затем с эритроцитарным Нd-диагностикумом, а в последующем с эритроцитарным Vi-диагностикумом. В прошлом широко применялась реакция Видаля с монодиагностикумами к конкретным возбудителям. Реакция ставится с 4-мя диагностикумами: О-брюшнотифозный монодиагностикум, Н-брюшнотифозный монодиагностикум, ОН-паратифозный А диагностикум, ОН-паратифозный В диагностикум. Диагностический титр реакции равен 1:200. Помимо диагностики острого заболевания с помощью реакции Видаля можно распознать и ранее болевших брюшным тифом (ретроспективная диагностика). Также может быть + в течение некоторого времени после прививок (прививочная реакция). В процессе развития инфекции накопление агглютининов идёт своеобразным путём: в конце первой недели появляются О-агглютинины (разгар заболевания); с выздоровлением они исчезают и появляются Н-агглютинины. ►В настоящее время Реакция Видаля используется реже. В основном применяют РНГА. Выбор метода и материала зависит от этапа заболевания: Срок Стадия заболеван Исследуемый материал Метод диагностики патогенеза ия 1. Кровь на гемокультуру 2. Пунктат костного мозга грудины на 1 неделя Бактериемия миелокультуру Бактериологический 3. Соскоб элементов сыпи на розеолокультуру 2 неделя Паренхиматозн 1. Кровь (сыворотка) Серологический Микробиология ГГМУ... [стр. 14 ⇒]

Выделение гемокультуры 1. Посев крови на среду Раппопорт (в соотношении 1:10). 2. Высев со среды Раппопорт на среду Эндо. 3. Откол лактозонегативных колоний со среды Эндо на трехсахарный агар. 4. Учет биохимических свойств на трехсахарном агаре. 5. Серотипирование выделенной культуры в реакции агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными О- и Н-сальмонеллезными сыворотками. 6. Биохимическая идентификация, определение антибиотикорезистентности. Выделение копрокультуры (уринокультуры, биликультуры) 1. Посев на среду обогащения (Мюллера, селенитовый бульон). 2. Высев со среды обогащения на среды Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар. 3. Реакция агглютинации на стекле лактозонегативных колоний с сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками. Дальнейший ход исследования см. «Выделение гемокультуры». Серодиагностика тифо-паратифозных заболеваний. Используются следующие реакции: 1. Реакция Видаля — реакция агглютинации (антитела появляются в конце первой недели от начала заболевания). Реакция ставится с четырьмя диагностикумами: О-брюшнотифозный монодиагностикум, Нбрюшнотифозный монодиагностикум, ОН-паратифозный А диагностикум, ОН-паратифозный В диагностикум. Диагностический титр реакции равен 1:200. 2. Реакция непрямой Vi-гемагглютинации для выявления Vi-антител в сыворотке крови реконвалесцентов и бактерионосителей. Антиген — эритроцитарный Vi-диагностикум (взвесь эритроцитов, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном). Положительный результат — эритроциты оседают в виде диска с неровными краями, отрицательный — в виде “пуговки” с ровными краями. Специфическая профилактика — вакцинация химической сорбированной брюшнотифозной моновакциной. Сальмонеллезы Эпидемиология Первичным источником сальмонелл являются животные: крупный рогатый скот, свиньи, водоплавающие птицы, куры, синантропные грызуны и большое число других животных. Дополнительным источником может быть человек (больной, носитель). 159... [стр. 159 ⇒]

Глава 7. Диагностикумы и антигены Биологические антигенные препараты, применяемые для обнаружения и титрования антител в сыворотке крови больных (с целью серодиагностики), могут представлять собой как взвесь убитых микроорганизмов, так и растворимые антигенные фракции. Для приготовления антигенных препаратов подбирают специальные штаммы микробов, обладающих высокой специфичностью и сохраняющих свои антигенные свойства после обработки. Антигенные препараты бывают корпускулярные и растворимые. Если корпускулярный антиген представляет собой взвесь убитых микроорганизмов, то растворимый – антигенные фракции. Растворимые антигены отличаются большей чувствительностью и стабильностью. Корпускулярные антигены готовят из взвеси микроорганизмов, инактивированных нагреванием при 100 в течение 15–20 минут, а также – спиртом или формалином. Растворимые антигены представляют собой антигенные фракции, полученные путем экстракции из чистой культуры микроорганизмов. Стандартные антигены, которые используются в иммунологических реакциях для выявления соответствующих им (специфических) антител в исследуемых сыворотках, называются диагностикумами. Тонкие различия АТ в изучаемой сыворотке обнаруживают при помощи монодиагностикумов, то есть препаратов, содержащих один антиген, например: групповой О- или специфический типовой – Н-, или Vi- антиген. Такие монодиагностикумы готовят, например, для распознавания заболеваний, вызванных микроорганизмами рода сальмонелл. В практике широко применяют в настоящее время эритроцитарные диагностикумы. Эритроцитарные диагностикумы содержат эритроциты человеческой или бараньей крови, сенсибилизированные бактериальными, риккетсиозными или вирусными антигенами. Для создания прочной связи антигена с поверхностью эритроцитов последние предварительно обрабатывают таннином, формальдегидом, глютаровым альдегидом, на альдегидные группировки которых прочно «садится» антиген. Применяют для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Кроме эритроцитов антигены могут адсорбироваться на поверхности 84... [стр. 86 ⇒]

Получение бактерийных диагностикумов Для приготовления бактерийных диагностикумов используют производственные штаммы бактерий, обладающие полноценными антигенными свойствами. Штамм микроорганизма засевается в жидкую или на плотную питательную среду и инкубируется в термостате при 37˚С в течение 18-20 ч. Полученные после культивирования взвеси бактерии подвергают инактивации различными методами, выбор которых зависит от свойств микроорганизма. В настоящее время для инактивации используют прогревание, обработку формалином, ацетоном, спиртом, мертиолятом и другими химическими веществами. Инактивированную взвесь микробов разводят до требуемой концентрации, а затем разливают в ампулы или флаконы. Ряд диагностикумов готовят в сухом виде, что обеспечивает их большую стабильность и длительность хранения. Каждая серия готового препарата проверяется на стерильность, активность, специфичность, агглютинабельность с гомологичной эталонной агглютинирующей сывороткой. Готовые диагностикумы, как правило, содержат от 3 до 50 млрд. микробных тел в 1 мл. В ряде случаев для серологической диагностики применяют не корпускулярные диагностикумы (приготовленные из цельных микробных клеток), а специфические антигены, выделенные из клеток. Бактериальная клетка представляет собой комплекс антигенов. Антигенными свойствами обладают жгутики (Н-антигены), капсула (К-антигены), клеточная стенка, (О-антигены), цитоплазматическая мембрана и другие компоненты клетки. Для установления более точной специфичности антител в сыворотке больного приготавливают специфические монодиагностикумы. Так, при брюшном тифе для определения групповых О-антител и видовых Н-антител применяются соответствующие О- и Ндиагностикумы. Принцип получения таких препаратов состоит в извлечении из микробной клетки специфических антигенов различными методами: многократным замораживанием с последующим оттаиванием, кипячением, действием ультразвука, спирта, соляной кислоты, фракционированием на сефадексах и т.д. Для этой цели сертифицированный штамм определенного вида бактерий выращивают на питательной среде при 37˚С. Через сутки биомассу освобождают от примесей питательной среды путем центрифугирования или фильтрации, хромотографии, а затем экстрагируют при низкой температуре десятикратным количеством 0,25 N раствора трихлоро221... [стр. 221 ⇒]

В диагностических целях при обнаружении антител в сыворотке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосителей используются серологические реакции. Для постановки таких реакций применяются диагностикумы - препараты, содержащие взвесь обезвреженных микроорганизмов или определенные антигены. Необходимость использования диагностикумов для серологических реакций связана не только с явным их преимуществом перед живыми культурами микробов (безопасность в работе), но еще и потому, что для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувствительностью к антителам и способностью длительно сохранять антигенные свойства. Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются химические вещества, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные свойства и применяются редко. В серологических реакциях (реакции агглютинации, реакции пассивной гемагглютинации, реакции связывания комплемента, реакции торможения гемагглютинации) для выявления специфических антител применяются: бактериальные, эритроцитарные и вирусные диагностикумы. Бактериальные диагностикумы могут содержать инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н или Vi-антигены и используются в реакциях агглютинации. Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с адсорбированными на них антигенами, извлеченными из бактерий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации). В том случае, когда РПГА используется для выявления антигена в выделениях больных, в тканях и др., применяют «антительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сенсибилизированные антителами. Вирусные диагностикумы — препараты, содержащие инактированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом), применяются в РСК (реакции связывания комплемента), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации. В настоящее время в лабораториях используются следующие диагноста кумы. 1. Бактериальный диагностикум сальмонелл тифа. Применяется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных. 2. Сальмонеллезные О-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%-ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-аптител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглютинации с сывороткой больных. 3. Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы. Используются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реже с диагностической целью. 4. Vi — брюшнотифозный диагностикум. Применяется в реакции агглютинации при выявлении брюшнотифозного бактерионосительства. 5. Единый бруцеллезный диагностикум — взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона. 6. Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум — взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллеэной инфекции. 7. Эритроцитарный Vi-диагностикум — эритроциты, сенсибилизированные очищенным Vi-антигеиом S. typhi, применяется в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионосительства. 8. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную мертиолатом или формалином. Диагностикумы необходимы при постановке РТГА с парными сыворотками больных для уточнения клинического диагноза и циркулирующего типа вируса гриппа. 9. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом клещевого энцефалита. Суспензию подвергают центрифугированию (для осветлення) и инактивируют химическими веществами. Диагностикум используется в РТГА и РСК с сывороткой больных при диагностике заболевания. [стр. 21 ⇒]

Таксономия. Характеристика. Микробиологический диагноз сальмонеллезов. Лечение. Острая кишечная зоонозная инфекция, вызываемая сероварами сальмонелл, характеризующаяся поражением ЖКТ. Морфологические свойства: подвижные, грам «-» палочки, капсулы нет. Хорошо растут на простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных – образуют колонии в R-и S-формах, на жидких – помутнение. На лактозособержащих средах образуют бесцветные колонии. Биохимическая активность: ферментация глк. до кислоты и газа, отсутствие ферментации лактозы, продукция сероводорода, отсутствие индолообразования. Антигенная структура: соматический О-антиген, жгутиковый Н-антиген, Некоторые – К-антиген. Род Salmonella состоит из двух видов — вида S. enterica, в который включены все сальмонеллы, являющиеся возбудителями человека и теплокровных животных, и вида S. bongori, который подразделяется на 10 сероваров. Вид S. enterica разделен на 6 подвидов, которые подразделены на серовары. Некоторые серовары сальмонелл, в частности S. Typhi, имеют полисахаридный Vi-антиген, являющийся разновидностью К-антигена. Эпидемиология. Возбудителями сальмонеллеза является большая группа сальмонелл, входящая в подвид enterica. Наиболее часто возбудителями сальмонеллезов у человека являются серовары S. Typhimurium, S. Dublin, S. Choleraesuis. Основные факторы передачи — мясо, молоко, яйца, вода. Патогенез и клиника. Заболевание протекает в локальной форме гастроэнтерита, ведущий синдром - диарейный. Инвазировав слизистую тонкого кишечника через М-клетки и проникнув в подслизистую, сальмонеллы захватываются макрофагами, переносясь ими в пейеровы бляшки, где формируют первичный очаг инфекции. При этом выделяются эндотоксин и белковый энтеротоксин. Энтеротоксин активирует поступление в просвет кишечника большого количества жидкости, К,Na. Понос, рвота. Иммунитет: Ненапряженный, серовароспецифический, опосредован секреторным IgA, который предотвращает процесс пенетрации сальмонеллами слизистой тонкого кишечника. В крови могут определяться антитела. Микробиологическая диагностика. Бактериологическому исследованию подвергают рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь, мочу, кровь. При идентификации выделенных культур необходим широкий набор диагностических О- и Н- сывороток. Для серологического исследования применяют РНГА, ИФА. Важное диагностическое значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания. Лечение. Применяется патогенетическая терапия, направленная на нормализацию водно-солевого обмена. При генерализованных формах — этиотропная антибиотикотерапия. Сальмонеллезные групповые, адсорбированные О- и Н-агглютинирующие сыворотки. Применяются для установления серогрупп и сероваров сальмонелл в реакции агглютинации. Сальмонеллезные О- и Н-монодиагностикумы представляют собой взвеси сальмонелл, убитых нагреванием (О-диагностикумы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы). Применяются для серодиагностики брюшного тифа. Профилактика. Специфическая профилактика сальмонеллеза у с/х животных и птиц. Неспецифическая профилактика - проведение ветеринарно-санитарных мероприятий. [стр. 24 ⇒]

Диссоциация увеличивается при повышении рН до 9—10 или понижении его до 5 — 3, повышении концентрации электролита до 15% и температуры — до 60°С, иногда вследствие сильного разведения смеси. Учет серол. реакций осуществляют визуально, иногда с помощью лупы и редко — микроскопа. При оценке С м . применяют 3 главных критерия: наличие и интенсивность реакции (в плюсах и др.); диагностический титр, .заранее отработанный для всех заболеваний, при к-рых используют серол мд; нарастание титра Ат в течение болезни в 4 раза и более. В процессе оценки См. часто возникает необходимость отличить специфическую реакцию (на видовые и типовые Аг) от группоспецифической (на межвидовые Аг) и иммунный ответ на текущую инфекцию — от иммунного ответа на перенесенное ранее заболевание и иммунизацию. В первом случае дифференциация основывается на использовании монодиагностикумов, скорости нарастания титра Ат, к-рая выше к специфическим Аг, реакции адсорбции Ат избытком Аг, легкости диссоциации иммунного комплекса под влиянием диссоциирующих факторов. Во втором случае для дифференциации применяют темпы нарастания титра Ат, к-рые выше при текущей инфекции, особенности проявления реакции и классов Ig, сопоставление результатов См. с бактериол. и клин, данными. Серологические реакции — пробирочные реакции специфического взаимодействия Аг и Ат. Используют для идентификации Ат и Аг, а также для определения их количеств (концентрации) и однородности. В микробиологии и вирусологии применяют РТГА, РН, РСК, РИФ, ИФА, РИА, РП, ИЭМ, реакцию гемадсорбции, встречный иммуноэлектрофорез и др. Серология — раздел иммунологии, изучающий взаимодействие Аг и Ат в пробирочных реакциях. См. Серологический метод. Серопрофилактика — профилактика инфекц. заболеваний с помощью иммунных с-к и сывороточных препаратов. Более эффектив... [стр. 297 ⇒]

Vi-диагностикумы вследствие малой устойчивости Vi-антигена можно отнести к наиболее трудно приготовляемым препаратам. В настоящее время наиболее употребительным является формалинизированный Vi-диагностикум, где Vi-аитиген стабилизируют 25% раствором хлористого кальция. Такой диагностикум сохраняет свои свойства в течение 10—12 месяцев (А. С. Зуев, 1959). Широкое признание для аналитической реакции Видаля получает применение Н-монодиагностикумов из однофазных салмонеллезных бактерий, существующих в естественном однофазном состоянии Н-антигена или искусственно переведенных в него методом селекции. В остальном способ приготовления Н-монодиагностикумов не отличается от указанного выше способа приготовления обычных формалиновых Н-диагностикумов (Р. Б. Гохберг, 1950; А. С. Зуев и др., 1956). Готовые диагностикумы проверяют на стерильность, агглютинабильность (с гомологичными иммунными сыворотками) и специфичность (с гетерологичными сыворотками, сыворотками лихорадящих больных и здоровых людей). Диагностикумы при хранении несколько снижают свои агглютинабильные свойства, могут частично лизироваться или утрачивать гомогенность (давать спонтанную агглютинацию). Поэтому их целесообразно готовить путем высушивания в смеси с сахарозо-желатиновой средой под вакуумом из замороженного состояния (П. Ф. Ладицкий и др., 1958). ПРИМЕНЕНИЕ АГГЛЮТИНИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК И ДИАГНОСТИКУМОВ... [стр. 611 ⇒]

4 этап. Учтите результаты «пестрого ряда». На основании всех полученных результатов определите видовую принадлежность выделенной гемокультуры; результаты занесите в протокол, заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории. 2. Учтите и оцените результаты РА Видаля с сывороткой обследуемого с подозрением на брюшной тиф и брюшнотифозными, паратифозными А и В диагностикумами. Критерием оценки результатов РА Видаля при однократно взятой сыворотке является диагностический титр, равный у невакцинированных взрослых 1:200, а у невакцинированных детей – 1:100 (см. занятие № 10). 3. Учтите и оцените результаты РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом и сыворотками обследуемых из декретированной группы (работники пищевой промышленности). РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом используется чаще всего для выявления бактерионосительства S. Typhi. Диагностический титр при оценке результатов равен 1:40 (см. занятие № 10). 4. Изучите и опишите в протоколе биопрепараты: адсорбированные агглютинирующие поливалентные групп А, В, С, Д, Е, монорецепторные О- и Н-сыворотки; брюшнотифозный бактериофаг; сальмонеллезный бактериофаг; сальмонеллезные диагностикумы, брюшнотифозная вакцина. 5.4. Итоговый контроль знаний:  ответы на вопросы по теме занятия 1. Обоснуйте выбор материала и методов микробиологической диагностики в зависимости от периода развития брюшного тифа, паратифов А и В и особенностей патогенеза их развития. 2. Назовите правила забора крови при выделении гемокультуры с целью диагностики брюшного тифа, паратифов А и В. 3. Обоснуйте выбор материалов для выявления бактерионосительства возбудителя брюшного тифа. 4. Назовите тесты дифференциации возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В. 5. Назовите основных возбудителей пищевых токсикоинфекций сальмонеллезной этиологии. 6. Особенности эпидемиологии сальмонеллезной пищевой токсикоинфекции.  решение ситуационных задач. ЗАДАЧА №1. При постановке РА Видаля с сыворотками обследуемых в 4-х рядах получены следующие результаты: а) титр РА с брюшнотифозным 0-диагностикумом 1:1600, с брюшнотифозным Ндиагностикумом – 1:400, с паратифозным А ОН-диагностикумом – 1:100, с паратифозным В ОН-диагностикумом – 1:50; б) титр РА с брюшнотифозным 0-монодиагностикумом 1:100, с брюшнотифозным Нмонодиагностикумом – 1:800, с паратифозным А и В ОН-диагностикумами – 1:50; в) титр РА с брюшнотифозным 0-монодиагностикумом 1:100, с брюшнотифозным Н, паратифозными А и В ОН-диагностикумами – 1:200. Как интерпретировать полученные результаты? ЗАДАЧА №2. В инфекционное отделение ГКБ №6 госпитализированы 7 человек с клиническим диагнозом: Острый гастроэнтерит? Сальмонеллёз? Из анамнеза: пострадавшие отмечали день рождения в кафе. Через 7-10 часов у них появилась рвота, частый жидкий стул, повышение температуры до 38о. Употребляли в пищу рыбное ассорти, салат из помидор, куриное заливное, шашлык, фрукты. 8... [стр. 8 ⇒]

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения диагностических препаратов, используемых для массовой прижизненной диагностики сальмонеллезов птиц. Сальмонеллезы птиц, вызываемые S.gallinarum-pullorum, S.typhimurium, S. enteritidis, являются наиболее широко распространенными бактериальными болезнями домашних птиц, причиняющими большой экономический ущерб промышленному птицеводству страны. Известны способы получения сальмонеллезного эритроцитарного диагностикума, включающие выделение антигенной фракции из микробных клеток S.gallinarum-pullorum или S.typhimurium в виде деградированного или недеградированного полисахарида, липополисахаридного или полисахаридно-полипепетидного комплекса, 0-антигенной фракции, с последующей сенсибилизацией ею формалинизированных эритроцитов [1,2] Однако диагностические препараты, полученные известными способами, предназначены для выявления птиц, инфицированных соответствующим гомологичным антигену видом сальмонелл, т.к. они по своей сути являются специфическими монодиагностикумами. Поэтому, чтобы выявить три инфекции сальмонеллезной этиологии, необходимо птицу исследовать каждым диагностикумом отдельно, т.е. проверить все поголовье три раза. В случае неблагополучия хозяйства такие исследования должны проводить ежемесячно до получения двукратных отрицательных результатов исследования по всему поголовью птиц. Другим значительным недостатком монодиагностикумов является то, что при многократном исследовании птица подвергается сильным стрессам, обусловленным голодной диетой перед исследованием и нарушением привычного режима дня, что снижает продуктивность на 5-6 яиц в год на каждую несушку. Кроме того, чтобы удовлетворить потребность птицеводства страны в эритроцитарных монодиагностикумах, необходимо большое количество эритроцитов барана, поэтому биопредприятия вынуждены постоянно содержать 5 7 тыс. голов баранов-доноров. Целью изобретения является разработка способа получения принципиально нового высокочувствительного и специфичного антигена, пригодного для исследования всех видов домашних птиц одновременно на носительство S.gallinarum-pullorum, S.typhimurium, S.enteritidis в полевых условиях, и снижение затрат труда при исследовании птиц. Поставленная цель достигается в способе получения сальмонеллезного эритроцитарного диагностикума, включающем формалинизацию эритроцитов баранов и их последующую сенсибилизацию полисахаридно-полипептидной фракцией Salmonella gallinarum-pullorum, тем, что сенсибилизацию осуществляют в процессе формалинизации в смеси с 0-антигенной фракцией Salmonella typhimurium, причем сенсибилизацию проводят при концентрации 1,8 2,1 мг сухого вещества каждой фракции на 0,9 1,0 мл 19 20% взвеси эритроцитов баранов на фосфатно-буферном растворе, содержащем 0,3 0,33% формальдегида, при 40 - 41oC в течение 14 16 ч. П р и м е р 1. А. Получение полисахаридно-полипептидной фракции S.gallinarum-pullorum. Бактериальную массу S.gallinarum-pullorum, выращенную на обычной питательной среде, осаждают центрифугированием при 5 тыс. об/мин в течение 25 мин, отмывают от компонентов среды физиологическим раствором при том же режиме центрифугирования. Осадок отмытой бактериальной массы суспендируют в 0,2 н. растворе ледяной уксусной кислоты до концентрации 90 100 млрд микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту мутности и экстрагируют при 92oC в течение 60 мин. Гидролизат освобождают от бактериальных клеток центрифугированием при 6 тыс.об/мин в течение 40 мин, доводят рН гидролизата до 4,5 5,0 10% раствором КОН или NaOH. Полисахаридно-полипептидную фракцию осаждают из гидролизата 8 10 объемами этанола, отделяют центрифугированием при 4 тыс. об/мин в течение 20 мин, растворяют в дистиллированной воде (рН 8,5 9,0) из расчета 6 г сухого вещества на 1 л воды и выдерживают в водяной бане при 90oC в течение 30 мин. Содержание общего, остаточного и белкового азота в растворе полисахаридно-полипептидной фракции определяют по Къельдалю, а редуцирующих веществ по Хагедорину-Йенсену. Количество указанных ингредиентов в 0,6% растворе фракции должно быть, мг редуцирующих веществ в пересчете на глюкозу 90 100, общего азота 35 40, остаточного азота 20 25, белкового азота 10 12. Б. Получение 0-антигенной фракции S.typhimurium. Бактериальную массу S. typhimurium, выращенную на обычной питательной среде, осаждают центрифугированием при 5 тыс.об/мин в течение 25 мин, отмывают физиологическим раствором от компонентов питательной среды при том же режиме центрифугирования, суспендируют в дистиллированной воде до концентрации 90 100 млрд микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту мутности и экстрагируют при 95oС в течение 2 ч. Экстракт освобождают от бактериальных клеток центрифугированием при 6 тыс.об/мин в течение 40 мин. 0-антигенную фракцию осаждают из экстракта 6-ю объемами этанола, отделяют центрифугированием при 4 тыс.об/мин в течение 20 мин, растворяют в дистиллированной воде (рН 7,6- 8,0) из расчета 6 г сухого вещества на 1 л воды и стерилизуют в водяной бане при 90oC в течение 30 мин. В. Сенсибилизация и формалинизация эритроцитов барана. 2 л крови барана в равном объеме раствора Олсевера центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин, осадок эритроцитов 3 раза отмывают 5-ю объемами фосфатно-буферного раствора (рН 7,2 7,4) при том же режиме центрифугирования и суспендируют до 20% концентрации в фосфатно-буферном растворе. На 1 л 20% взвеси эритроцитов на фосфатно-буферном растворе добавляют по 300 мл 0,6% раствора полисахаридно-полипептидной фракции S.gallinarum-pullorum и 0-антигенной фракции S.typhimurium, формальдегид из расчета 0,3% тщательно перемешивают и взвесь эритроцитов выдерживают при 40oC в течение 16 ч. По истечении срока сенсибилизации и формалинизации эритроциты осаждают центрифугированием при 2000 об/мин в течение 10 мин, отмывают 3 раза 5-ю объемами фосфатно-буферного раствора. Осадок отмытых сенсибилизированных и формалинизированных эритроцитов суспендируют в фосфатно-буферном растворе до 10% концентрации, добавляют формальдегид из расчета 0,03% Поливалентный антиген, приготовленный предлагаемым способом, сохраняет активность и специфичность в течение 9 мес. при +4 oC +8oC. При таком способе получают высокочувствительный, специфичный поливалентный антиген, состоящий из полисахаридно-полипептидной фракции S.gallinarum-pullorum и 0-антигенной фракции S.typhimurium, обладающий высокой гемосенситивной, антителосвязывающей и агглютинирующей активностью, суммарная антигенная формула которого включает все 0-антигенные рецепторы, присущие S. gallinarum-pullorum, S. typhimurium, S.enteritidis, выявляет птиц, инфицированных любым из перечисленных видов сальмонелл в любом возрасте, и по всей диагностической ценности в кровекапельной реакции непрямой гемагглютинации не только не уступает, но и превосходит существующие монодиагностикумы (см. табл. 1 13). Сенсибилизация эритроцитов полисахаридно-полипептидной и 0-антигенной фракции одновременно с формализацией позволяет максимально снизить эффект конкуренции сенситинов, повысить степень насыщения рецепторов эритроцитов сенситинами, устраняет феномен теней и рыхлого связывания сенситинов. Кроме того, технология промышленного производства поливалентного антигена более надежна, проста и на 48 ч требует меньше времени, чем при изготовлении любого монодиагностикума, а также в 2-3 раза сокращает расход сенситинов и эритроцитов барана. ТТТ1 ТТТ2 ТТТ3 ТТТ4 ТТТ5 ТТТ6 ТТТ7 ТТТ8 ТТТ9 ТТТ10 ТТТ11 ТТТ12 ТТТ13 ТТТ14. [стр. 1 ⇒]